25 års-reglen kan påberåbes i afskedigelsessager med påstand om godtgørelse for usaglig opsigelse, som afgøres af Afskedigelsesnævnet på den del af det overenskomstdækkede arbejdsmarked, hvor nævnet har kompetence til at afgøre afskedigelsessager.

Reglen finder anvendelse i situationer, hvor en arbejdsgiver opsiger en medarbejder, som har været ansat i mere end 25 år, og hvor årsagen til opsigelsen er nedsækringer. 

Reglen indebærer, at man i ovennævnte situation skal kunne bevise, at der ikke har været andre muligheder end at opsige den pågældende medarbejder med lang anciennitet frem for at opsige en medarbejder med kortere anciennitet.